Le but du tampon en électrophorèse

Le but du tampon en électrophorèse

L'électrophorèse est une méthode fréquemment utilisée en biochimie et en biologie moléculaire pour séparer les macromolécules, généralement des protéines ou des acides nucléiques. Cette séparation permet d'isoler et d'analyser des protéines individuelles ou des séquences d'acides nucléiques à partir d'un mélange complexe d'entre elles. Un exemple typique de son utilisation serait la séparation des fragments d'ADN qui ont été produits à partir d'une communauté microbienne en utilisant la PCR (Polymerase Chain Reaction).

Principes de l'électrophorèse

L'électrophorèse sépare les molécules le long d'un gradient en fonction de leur taille, de leur charge ou de leurs propriétés. Ce gradient peut être un champ électrique ou, dans le cas de l'électrophorèse sur gel à gradient de dénaturation (DGGE), un dénaturant tel qu'un mélange d'urée et de formamide. Les protéines migreront vers l'anode si elles sont chargées négativement et la cathode si elle est chargée positivement; la distance de migration en fonction de la taille.

Electrophorèse sur gel en gradient de dénaturation

Avec DGGE, l'ADN se déplace le long d'un gradient de pouvoir dénaturant croissant, jusqu'à ce que la puissance est suffisante pour dénaturer ce fragment d'ADN particulier. À ce stade, la migration s'arrête, ce qui signifie que les fragments seront séparés en fonction de leur susceptibilité à la dénaturation.

Que fait le tampon?

Dans le cas d'une électrophorèse qui se sépare en fonction de la charge, la charge est transmise par les ions fournis par le tampon. Le tampon, en fournissant un réservoir d'acide faible et de base, maintient également le pH dans une plage étroite. Ceci est important parce que la structure et la charge d'une protéine ou d'un acide nucléique changeront si elles sont soumises à des changements de pH significatifs, empêchant ainsi une séparation appropriée.

Tampons typiques

Différents tampons fonctionnent mieux pour différentes plages de pH souhaitées. Les tampons typiques utilisés comprennent les acides acétique, borique, phosphorique et citrique, la glycine et la taurine. En général, la valeur de pKa (constante de dissociation de l'acide) doit être proche du pH requis, et les tampons fournissant des espèces de faible amplitude de charge sont préférés, afin de ne pas conduire trop de courant.

Résumé

L'électrophorèse sépare les macromolécules selon la taille, la charge et / ou les propriétés, et un tampon est nécessaire pour fournir un pH stable et une conduction de charge.

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